CDK5RAP3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408965-ACT

CDK5RAP3（C53/LZAPとしても知られる）は、多機能なヒトの制御タンパク質であり、細胞周期進行、ストレス応答、シグナル伝達の制御に関与すると考えられています。NF-κBおよびp53関連プログラムの調節に結び付けられており、増殖、アポトーシス、炎症性シグナルを司る転写出力に影響を及ぼします。さらにCDK5RAP3は、ユビキチン–プロテアソーム系やER関連ストレス機構との相互作用など、タンパク質恒常性（プロテオスタシス）経路にも関与し、タンパク質毒性条件下での細胞適応を形作ります。CDK5RAP3の発現異常は、複数のがん種をはじめ、増殖やストレスシグナルの変調を特徴とする他の疾患でも報告されており、疾患関連経路における機構的ハブとしての有用性が示唆されます。

CDK5RAP3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CDK5RAP3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CDK5RAP3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CDK5RAP3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCDK5RAP3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CDK5RAP3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCDK5RAP3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCDK5RAP3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCDK5RAP3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCDK5RAP3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。