Plásmido CRISPR de Activación (h) CDK5RAP3: sc-408965-ACT

CDK5RAP3 (también conocida como C53/LZAP) es una proteína reguladora humana multifuncional implicada en el control de la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés y la transducción de señales. Se ha relacionado con la modulación de programas asociados a NF-κB y p53, influyendo en las salidas transcripcionales que gobiernan la proliferación, la apoptosis y la señalización inflamatoria. CDK5RAP3 también participa en vías de homeostasis proteica, incluidas interacciones con el sistema ubiquitina–proteasoma y la maquinaria de estrés asociada al retículo endoplásmico (RE), que moldean la adaptación celular a condiciones de proteotoxicidad. Se ha informado de una expresión desregulada de CDK5RAP3 en múltiples contextos de cáncer y en otros trastornos caracterizados por alteraciones del crecimiento y de la señalización de estrés, lo que respalda su utilidad como nodo mecanístico en vías relevantes para la enfermedad.

CDK5RAP3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDK5RAP3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CDK5RAP3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDK5RAP3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDK5RAP3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CDK5RAP3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDK5RAP3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CDK5RAP3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CDK5RAP3 en células tumorales con expresión de CDK5RAP3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.