CDK5RAP1 Double Nickase Plasmid (h): sc-407278-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CDK5RAP1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CDK5RAP1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CDK5RAP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDK5RAP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CDK5RAP1: sc-398764
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CDK5RAP1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407278-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CDK5RAP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407278-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDK5RAP1 (CDK5-regulatorische-Untereinheit-assoziiertes Protein 1) ist ein mitochondriales Enzym, das über tRNA-Modifikationen an der posttranskriptionellen Regulation beteiligt ist und eine effiziente mitochondriale Translation sowie die oxidative Phosphorylierung unterstützt. Durch die Beeinflussung der Integrität der mitochondrialen Proteinsynthese wirkt CDK5RAP1 auf die zelluläre Bioenergetik, das Redoxgleichgewicht und Stressanpassungswege. Störungen der CDK5RAP1-Funktion wurden mit einer veränderten mitochondrialen Homöostase in Verbindung gebracht und werden in Zusammenhängen untersucht, in denen metabolische Umprogrammierung und mitochondriale Dysfunktion zur Krankheitsbiologie beitragen, einschließlich Krebs und Neurodegeneration. Als mitochondrienassoziierter Regulator stellt CDK5RAP1 einen gut untersuchbaren Angriffspunkt dar, um zu klären, wie mitochondriale Genexpression den Zellzustand und das Überleben unter Stress beeinflusst.
CDK5RAP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDK5RAP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDK5RAP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDK5RAP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDK5RAP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.