Cdk5 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-419602-LAC

A quinase 5 dependente de ciclina (Cdk5) é uma quinase de serina/treonina direcionada por prolina que, ao contrário das CDKs do ciclo celular, é ativada principalmente por p35/p39 e atua em células pós-mitóticas. Em sistemas murinos, coordena o desenvolvimento neuronal, o tráfego de vesículas sinápticas, a dinâmica do citoesqueleto e a sinalização dependente de atividade por meio da fosforilação de substratos envolvidos na estabilidade dos microtúbulos e na orientação axonal. A Cdk5 interage com vias que regulam a sinalização de cálcio, a neurotransmissão por dopamina e glutamato e redes de quinases responsivas ao estresse que influenciam a sobrevivência e a plasticidade neuronais. A atividade desregulada da Cdk5 tem sido associada a fenótipos neurodegenerativos e neuroinflamatórios, eventos de fosforilação aberrantes e alteração da função de circuitos, relevantes para modelos de doença de Alzheimer, doença de Parkinson, epilepsia e dor neuropática.

As Partículas de Ativação Lentivirais Cdk5 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Cdk5 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Cdk5 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Cdk5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Cdk5. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Cdk5 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.