Cdc42EP4 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-408523-LAC

CDC42EP4 codifica a Cdc42EP4, uma proteína efetora de Cdc42 da família Borg/CEP que conecta a sinalização de GTPases Rho à remodelação do citoesqueleto de actina e septinas. Ao coordenar a organização dos filamentos e das estruturas contráteis, a Cdc42EP4 contribui para o controle da forma celular, adesão, polaridade e programas de migração que são centrais para a morfogênese tecidual e para a mecanobiologia celular. Alterações desreguladas nas saídas da via de CDC42 e na reorganização do citoesqueleto são frequentemente implicadas em comportamento invasivo, interações estromais alteradas e outros fenótipos relevantes para pesquisas em câncer e doenças inflamatórias. Como um nó de leitura a jusante de Cdc42, a Cdc42EP4 oferece um ponto de acesso prático para investigar a arquitetura do citoesqueleto e mudanças de motilidade dependentes de sinalização.

As Partículas de Ativação Lentivirais Cdc42EP4 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CDC42EP4 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Cdc42EP4 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CDC42EP4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Cdc42EP4. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CDC42EP4 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.