Cdc42EP4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408523-ACT

CDC42EP4 codifica a proteína Cdc42EP4, um efetor de GTPases Cdc42/Rho que se liga a septinas e a componentes associados à actina para coordenar a remodelação do citoesqueleto. Contribui para a formação de fibras de estresse, para a dinâmica das adesões focais e para alterações na forma celular que influenciam a migração e a adesão por meio de redes de sinalização dependentes de GTPases Rho. Ao modular a organização actomiosina e programas de polaridade celular, a Cdc42EP4 é relevante para estudos de transições do tipo epitélio–mesênquima, comportamento invasivo e respostas ao microambiente em células humanas. Foi relatada expressão alterada de CDC42EP4 em contextos de motilidade desregulada e de controlo do citoesqueleto, o que apoia a sua investigação em biologia do cancro, remodelação associada à fibrose e modelos de movimento celular no desenvolvimento.

Cdc42EP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDC42EP4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cdc42EP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDC42EP4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDC42EP4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cdc42EP4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDC42EP4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cdc42EP4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cdc42EP4 em células tumorais com expressão de CDC42EP4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.