Cdc25A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400345

概要

CDC25Aは、ヒトの二重特異性ホスファターゼであるCdc25Aをコードしており、サイクリン依存性キナーゼ（CDK）の主要な活性化因子として機能する。Cdc25Aは、G1/S移行時およびS期への進入時にCDK上の阻害性リン酸化部位を脱リン酸化することで細胞周期の進行を促進する。その活性はチェックポイントシグナルによって厳密に制御されており、複製ストレスやDNA損傷に応答してCDC25Aの安定性を調節するATR/ATM–CHK1/CHK2経路などが関与する。増殖シグナルとゲノム完全性の監視を結び付けることにより、Cdc25AはDNA複製のタイミング、チェックポイントからの回復、そして有糸分裂へ進む能力に影響を及ぼす。CDC25Aの発現や分解（ターンオーバー）の異常は、異常な増殖とゲノム不安定性に関連付けられており、がん化シグナル、チェックポイント異常、ならびに細胞周期駆動性の疾患機構を研究する上で、しばしば注目される対象となっている。

Cdc25A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCDC25A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CDC25A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CDC25Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Cdc25Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Cdc25Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CDC25A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Cdc25Aの機能に不可欠なCDC25Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CDC25Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Cdc25A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCdc25A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CDC25A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Cdc25A HDRプラスミド（h）および Cdc25A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCDC25Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCDC25A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。