CD88 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401968-ACT

C5AR1 codifica o CD88, um recetor acoplado à proteína G para a anafilatoxina do complemento C5a, que liga o reconhecimento imunitário inato à rápida ativação de leucócitos. A sinalização do CD88 desencadeia vias dependentes de Gαi, incluindo PI3K–AKT, MAPK/ERK e NF-κB, promovendo quimiotaxia, desgranulação, explosão oxidativa e libertação de citocinas em linhagens mieloides. Por meio destes processos, o CD88 ajuda a coordenar a inflamação mediada pelo complemento e o tráfego de leucócitos em microambientes tecidulares. A atividade desregulada de C5AR1 tem sido associada a contextos inflamatórios e autoimunes, cascatas inflamatórias do tipo sépsis e biologia mieloide associada a tumores, tornando-o relevante para estudos de imunologia mecanística.

CD88 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C5AR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD88 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C5AR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C5AR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD88. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C5AR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD88 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD88 em células tumorais com expressão de C5AR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.