CD8-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419576

概要

Cd8a は、膜貫通型糖タンパク質である CD8-α をコードしており、CD8αα ホモ二量体または CD8αβ ヘテロ二量体を形成し、MHC クラスIに制限されたT細胞認識における共受容体として機能します。CD8-α は LCK および TCR/CD3 複合体と会合することで、抗原依存的シグナル伝達、免疫シナプス形成、ならびに細胞傷害性への分化、サイトカイン産生、エフェクターメモリー応答を制御する下流の活性化プログラムを増強します。さらに CD8-α は、胸腺での選択や CD8+ T 細胞の末梢ホメオスタシスにも寄与し、T細胞の発生と免疫監視を司る経路との関連が示されます。CD8-α 依存的機能の変化は、感染、腫瘍免疫、自己免疫性炎症のモデルにおいて重要であり、CD8+ T 細胞の頻度やシグナル強度の変動が組織病態を変化させ得ます。

CD8-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCd8a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cd8a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cd8aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CD8-αタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CD8-αシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cd8a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CD8-αの機能に不可欠なCd8aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cd8aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CD8-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCD8-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cd8a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CD8-α HDRプラスミド（m）および CD8-α HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCd8aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCd8a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。