Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
CD8-α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419576
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CD8-α El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CD8-α, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD8-α Anticuerpo (53-6.7): sc-18913
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CD8-α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419576 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Cd8a codifica CD8-α, una glucoproteína transmembrana que forma homodímeros CD8αα o heterodímeros CD8αβ y actúa como correceptor para el reconocimiento de linfocitos T restringido por el MHC de clase I. Al asociarse con LCK y con el complejo TCR/CD3, CD8-α potencia la señalización dependiente de antígeno, la formación de la sinapsis inmunológica y los programas de activación posteriores que controlan la diferenciación citotóxica, la producción de citocinas y las respuestas de memoria efectora. CD8-α también contribuye a la selección tímica y a la homeostasis periférica de los linfocitos T CD8+, lo que lo vincula con vías que regulan el desarrollo de las células T y la vigilancia inmunitaria. La alteración de la función dependiente de CD8-α es relevante en modelos de infección, inmunología tumoral e inflamación autoinmune, donde los cambios en la frecuencia de los linfocitos T CD8+ o en la intensidad de la señalización pueden remodelar la patología tisular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD8-α (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cd8a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cd8a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cd8a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD8-α.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cd8a para la investigación de la señalización de CD8-α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Cd8a críticos para la función de CD8-α
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cd8a para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CD8-α CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CD8-α CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cd8a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD8-α (m) y el plásmido HDR CD8-α (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cd8a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cd8a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.