CD73 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400307-LAC

ヒトNT5EはCD73をコードしており、CD73はグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の細胞外（ecto）5′-ヌクレオチダーゼとして、細胞外AMPを脱リン酸化してアデノシンへと変換する。これにより、細胞表面におけるプリン作動性シグナル伝達およびヌクレオチド恒常性が形成される。CD73によって産生されたアデノシンは、アデノシン受容体経路を介してcAMP依存性シグナル、免疫細胞活性化、内皮バリア機能、血管トーンを調節し、さらにATP/ADP分解においてCD39など上流のエクトヌクレオチダーゼと機能的に協調する。NT5E/CD73活性は、低酸素や炎症に関連した細胞外ヌクレオチド環境のリモデリングという文脈でしばしば検討され、アデノシン利用可能性の変化が白血球トラフィッキングや間質細胞との相互作用を変え得る。NT5E発現の破綻は、がん微小環境における免疫調節性表現型や、血管・炎症性の病態生物学と関連づけられており、組織ストレス応答の研究における機序解明上の結節点としての利用を支持している。

CD73 レンチウイルス活性化粒子（h）は、完全な相乗的活性化メディエーター（SAM）転写活性化システムを、トランスダクション可能な高力価レンチウイルス粒子に封入することでこのニーズに対応し、より広範なヒト細胞タイプにおいて効率的なNT5Eの発現上昇を可能にします。

CD73 レンチウイルス活性化粒子（h）は、レンチウイルス媒介を介して、シナジー活性化メディエーター（SAM）システムのすべての機能的構成要素を届ける。このシステムは、標的細胞へ共導入される3種類の粒子製剤で構成されています。1つは、VP64転写活性化ドメインとブラスティシジン耐性遺伝子を融合させた、触媒活性のないdCas9（D10AおよびN863A変異）をコードするものです。ヒグロマイシン耐性遺伝子を有するMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードするもの；および、2つのMS2 RNAアプタマーと融合した標的特異的20塩基対sgRNAをコードし、プロマイシン耐性遺伝子を有するもの。レンチウイルスによる導入および発現カセットのゲノムへの組み込み後、SAM構成要素は安定して発現し、NT5E転写開始点の上流にある近位プロモーター領域内の標的座に集合する。そこでは、VP64、p65、およびHSF1が協調して作用し、内因性の転写機構を動員して、内因性CD73の発現を持続的に上向きに調節する。ヌクレアーゼ不活性型dCas9を使用することで、二本鎖DNA切断の導入を回避し、天然のNT5Eゲノム座および制御機構を維持します。

レンチウイルス形式には、いくつかの実用的な利点があります。安定したゲノム組み込みにより、細胞分裂を経ても遺伝的に継承される活性化がサポートされます。高力価の粒子調製により、施設内でのウイルス生産の必要性がなくなります。また、初代培養細胞、非増殖性細胞、およびトランスフェクション抵抗性細胞との互換性により、実験の適用範囲が広がります。成功したトランスダクションは、プロマイシン、ハイグロマイシン、ブラスティシジンを用いた三重抗生物質選別により確認および選別が可能である。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。