Particules Lentivirales d'Activation (h) CD73: sc-400307-LAC

NT5E humain code CD73, une ecto‑5′‑nucléotidase ancrée par glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui déphosphoryle l’AMP extracellulaire en adénosine, façonnant ainsi la signalisation purinergique et l’homéostasie des nucléotides à la surface cellulaire. L’adénosine produite par CD73 active les voies des récepteurs de l’adénosine pour réguler la signalisation dépendante de l’AMPc, l’activation des cellules immunitaires, la fonction de barrière endothéliale et le tonus vasculaire, et elle coopère fonctionnellement avec des ectonucléotidases en amont telles que CD39 dans le catabolisme de l’ATP/ADP. L’activité de NT5E/CD73 est fréquemment étudiée dans le contexte du remodelage du milieu des nucléotides extracellulaires associé à l’hypoxie et à l’inflammation, où des variations de disponibilité de l’adénosine peuvent modifier le trafic des leucocytes et les interactions avec le stroma. Une expression dérégulée de NT5E a été associée à des phénotypes immunorégulateurs dans les microenvironnements tumoraux ainsi qu’à la pathobiologie vasculaire et inflammatoire, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique dans les études des réponses des tissus au stress.

Les particules d'activation lentivirales CD73 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NT5E dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CD73 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NT5E, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CD73. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NT5E ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.