CD71/TFRC/Transferrin Receptor Double Nickaseプラスミド (m): sc-423504-NIC

マウスのTfrcはCD71/TFRCをコードしており、トランスフェリンに結合して鉄を担持したリガンドをクラスリン依存的にエンドサイトーシスし、細胞内への鉄供給を担うII型膜貫通受容体です。TFRCは細胞の鉄取り込みおよび鉄応答性シグナル伝達を制御することで、ヘム合成、ミトコンドリア呼吸、DNA複製、ならびに酸化ストレス恒常性に影響し、その発現は増殖状態と密接に連動しています。CD71は鉄需要の高い急速に分裂する細胞や免疫系細胞系列で顕著に発現し、TFRCの生物学をリンパ球活性化、赤血球形成、代謝リプログラミングと結び付けます。鉄代謝の異常やTFRC発現の変化は、貧血、炎症、神経変性、腫瘍関連の鉄代謝といった文脈でしばしば研究対象となっています。

CD71/TFRC/Transferrin Receptor ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Tfrc 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Tfrc内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Tfrcの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Tfrcが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。