CD69 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-419566-ACT-2

O gene Cd69 de camundongo codifica o CD69, um receptor de superfície induzível do tipo lectina C–like que é rapidamente regulado positivamente após estimulação do receptor de antígeno ou por citocinas, atuando como um marcador precoce de ativação de linfócitos. O CD69 modula o tráfego de células imunes e sua retenção em tecidos, em parte por meio da regulação da sinalização do receptor de esfingosina-1-fosfato, e influencia programas de ativação a jusante, incluindo respostas associadas a NF-κB e MAPK que moldam a função efetora de células T e NK. Alterações na atividade do CD69 têm sido associadas à desregulação imunológica em modelos de inflamação, autoimunidade e imunologia de tumores, refletindo seu papel em equilibrar sinais de ativação e migração. A edição do gene Cd69 em sistemas murinos sustenta estudos mecanísticos da cinética de ativação, da biologia de células imunes residentes em tecidos e de análises de perturbação de vias em células primárias ou em modelos de imunologia in vivo.

CD69 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cd69 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD69 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cd69 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cd69, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD69. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cd69 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD69 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD69 em células tumorais com expressão de Cd69 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.