CD30 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423446

概要

マウスのTnfrsf8はCD30をコードしており、CD30は活性化リンパ球に発現するTNF受容体スーパーファミリーの一員である。CD30はTRAFなどのアダプタータンパク質を介してシグナルを伝達し、NF-κBおよびMAPK経路の活性を調節する。CD30依存的なシグナル伝達は、T細胞およびB細胞の活性化プログラム、サイトカイン産生、ならびに免疫恒常性を形作る生存・死の選択に影響を与える。マウスモデルでは、CD30機能の変化を用いて、リンパ球分化、免疫制御、リンパ組織内の炎症に関わる機序が解析されてきた。CD30関連経路の破綻は、異常な免疫活性化やリンパ増殖性表現型の研究とも関連し、免疫学研究における遺伝学的ハブとしての有用性を支持している。

CD30 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTnfrsf8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tnfrsf8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tnfrsf8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CD30タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CD30シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tnfrsf8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CD30の機能に不可欠なTnfrsf8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tnfrsf8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CD30 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCD30 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tnfrsf8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CD30 HDRプラスミド（m）および CD30 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTnfrsf8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTnfrsf8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。