CD3-ζ/η CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419556

概要

Cd247 は、T細胞受容体（TCR）複合体のシグナル伝達サブユニットである CD3ζ/η をコードしており、免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ITAM）を含むアダプターとして、抗原認識を細胞内のリン酸化カスケードへ結び付けます。TCR が刺激されると、CD3ζ/η の ITAM が LCK や ZAP70 などのキナーゼをリクルートして活性化し、LAT/SLP-76 シグナロソームの形成を促進するとともに、下流の MAPK、NF-κB、NFAT 経路を駆動します。これらの経路は T 細胞の活性化、サイトカイン産生、生存を制御します。CD247 の発現やシグナル伝達の変化は、T 細胞応答性の低下や免疫制御異常に寄与し、炎症性・自己免疫性の表現型や、腫瘍微小環境における免疫回避とも関連づけられています。マウスでは、Cd247 の改変は胸腺での選択、末梢トレランス、ならびにエフェクター T 細胞と疲弊（exhausted）T 細胞状態の解明に広く用いられています。

CD3-ζ/η CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCd247遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cd247内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cd247のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CD3-ζ/ηタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CD3-ζ/ηシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cd247欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CD3-ζ/ηの機能に不可欠なCd247エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cd247ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CD3-ζ/η CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCD3-ζ/η CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cd247遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CD3-ζ/η HDRプラスミド（m）および CD3-ζ/η HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCd247ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCd247標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。