CD3-ε CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400240-ACT

CD3E は、抗原認識を胸腺細胞の発生および末梢 T 細胞の活性化に必要な細胞内シグナル伝達へと結び付ける T 細胞受容体（TCR）-CD3 複合体の必須構成要素である CD3-ε をコードする。CD3 鎖に存在する免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ITAM）を介して、CD3-ε は LCK や ZAP70 を含む近位キナーゼカスケードを支持し、さらに NF-κB、NFAT、MAPK などの下流経路を伝播させることで、サイトカイン産生、増殖、分化を制御する。CD3E の発現や CD3 複合体のアセンブリが攪乱されると、TCR シグナル伝達の閾値が破綻し、免疫恒常性が変化して、免疫調節異常の表現型に寄与し得る。T 細胞の系譜を規定する分子として、CD3-ε は受容体シグナル伝達アーキテクチャ、T 細胞の機能状態、ならびに in vitro の免疫腫瘍学モデルの研究で広く用いられている。

CD3-ε CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD3Eの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD3-ε CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD3E 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD3E転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD3-εの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD3E遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD3-ε依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD3E発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD3-ε経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。