CD22 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419539-LAC

Il gene Cd22 del topo codifica CD22, una lectina tipo immunoglobulina legante l’acido sialico, ristretta alle cellule B, che funge da co-recettore inibitorio del recettore delle cellule B (BCR). Attraverso il reclutamento di fosfatasi come SHP-1 sui motivi ITIM, CD22 attenua la segnalazione prossimale del BCR e modula vie a valle incluse PI3K/AKT, MAPK e i flussi di calcio, contribuendo così a definire le soglie di attivazione, la sopravvivenza e la selezione guidata dall’antigene. CD22 contribuisce inoltre all’adesione e al traffico delle cellule B tramite interazioni con glicani α2,6-sialilati e influenza la dinamica del centro germinativo e i checkpoint di tolleranza. Un’espressione o una segnalazione di CD22 deregolate sono ampiamente rilevanti negli studi sull’iperreattività delle cellule B, sulla regolazione immunitaria associata all’autoimmunità e sui meccanismi di neoplasie della linea B in modelli sperimentali murini.

Le particelle di attivazione lentivirale CD22 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Cd22 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CD22 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Cd22, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CD22. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Cd22 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.