CD20 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416765-ACT

MS4A1はCD20をコードしており、CD20は4回膜貫通型の膜タンパク質です。CD20は主にBリンパ球において、pre-B段階から成熟段階にかけて発現し、B細胞の活性化、増殖、分化の制御に関与します。CD20は膜の構造・配置の組織化や、カルシウムフラックスに関連するシグナル伝達事象に寄与し、抗原刺激による活性化時の下流の転写応答を形成します。MS4A1の発現変化やCD20依存的シグナルは、B細胞系譜の生物学や免疫調節異常の文脈でしばしば研究されています。B細胞アイデンティティと密接に結びついた細胞表面マーカーとして、CD20はB細胞の恒常性や病的B細胞状態を規定する経路を解析するために広く用いられています。

CD20 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MS4A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD20 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MS4A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMS4A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD20の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMS4A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD20依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMS4A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD20経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。