CD1D Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402435-NIC

CD1D codifica a CD1d, uma molécula apresentadora de antígenos semelhante ao MHC de classe I não clássico, que se liga a antígenos lipídicos próprios e microbianos e os expõe na superfície celular para reconhecimento por células T natural killer invariantes (iNKT). Por meio de interações CD1d–TCR, coordena a ativação de células T de perfil inato, a rápida liberação de citocinas e a comunicação cruzada subsequente com células dendríticas, células NK e células T convencionais, moldando a vigilância e a tolerância imunológicas. A função de CD1D está integrada ao tráfego endossomal, às vias de carregamento de lipídios e aos processos de apresentação de antígenos que influenciam a sinalização inflamatória e a homeostase imune tecidual. Alterações na apresentação de antígenos lipídicos mediada por CD1d têm sido implicadas em desregulação imune relevante para infecções, imunologia tumoral e condições autoimunes ou inflamatórias, motivando estudos mecanísticos em diversos tipos celulares.

CD1D O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CD1D em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CD1D. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CD1D. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CD1D interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.