Cbl Plasmide Double Nickase (h): sc-400561-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cbl Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Cbl Double Nickase Plasmid (h) e il Cbl Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CBL. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cbl Antibody (A-9): sc-1651
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cbl Plasmide Double Nickase (h) | sc-400561-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cbl Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400561-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CBL codifica Cbl, una ligasi E3 dell’ubiquitina e proteina adattatrice che coordina la downregulation delle tirosin-chinasi recettoriali e non recettoriali attivate. Attraverso il suo dominio TKB e l’attività di ubiquitinazione dipendente dal RING finger, Cbl promuove il traffico e la degradazione mediati dall’ubiquitina di complessi di segnalazione, modulando gli output di vie quali EGFR/RTK, MAPK/ERK, PI3K–AKT e la segnalazione dei recettori immunitari. Cbl contribuisce inoltre all’endocitosi, al controllo qualità delle proteine e alla regolazione a feedback dell’intensità e della durata della trasduzione del segnale. La disregolazione o le mutazioni di CBL sono associate a una segnalazione aberrante delle tirosin-chinasi e alla biologia delle malattie ematologiche, rendendolo un nodo utile per studiare le reti di segnalazione oncogeniche e i circuiti regolatori delle cellule immunitarie.
Cbl Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CBL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CBL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CBL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CBL interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.