Cbl-3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-407624-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Cbl-3O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Cbl-3 (h) e o Plasmídeo Double Nickase Cbl-3 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para CBLC. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Cbl-3 Anticorpo (F-2): sc-390648
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Cbl-3 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-407624-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cbl-3 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-407624-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CBLC codifica a Cbl-3, uma ligase E3 de ubiquitina do tipo RING que atua como adaptadora para a ubiquitinação e a downregulation endocítica de tirosina-quinases de receptor e não receptor ativadas. Por meio de sua ligação dependente de TKB/SH2 a motivos de fosfotirosina e do recrutamento de enzimas conjugadoras de ubiquitina, a Cbl-3 ajuda a ajustar a amplitude e a duração do sinal em vias ligadas à sinalização por fatores de crescimento e por receptores imunes, incluindo componentes das redes MAPK/ERK e PI3K/AKT. A atividade de CBLC contribui para o controle do tráfego de receptores, da proteostase e da regulação por feedback negativo de cascatas de sinalização dependentes de fosforilação. A desregulação das ligases de ubiquitina da família CBL e de seus substratos tem sido associada a estados alterados de sinalização celular relevantes para transformação oncogênica e perturbações na sinalização hematopoética, tornando CBLC um locus útil para estudos mecanísticos da homeostase da sinalização.
Cbl-3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CBLC em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CBLC. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CBLC. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CBLC interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.