caveolin-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400569

Panoramica

CAV3 codifica la caveolina-3, un componente strutturale delle caveole arricchito nel muscolo, che organizza i microdomini di membrana e funge da impalcatura per complessi di segnalazione a livello del sarcolemma. La caveolina-3 contribuisce alla meccanoprotezione e al traffico di membrana e modula vie che coinvolgono la segnalazione dei GPCR, la segnalazione del recettore dell’insulina, la regolazione dei canali ionici e la segnalazione dell’ossido nitrico, grazie alla compartimentalizzazione di recettori e chinasi. Nel muscolo striato, supporta l’organizzazione dei tubuli T, l’accoppiamento eccitazione–contrazione e la stabilità del complesso proteico associato alla distrofina. Alterazioni della funzione o dell’espressione di CAV3 sono associate a caveolinopatie che interessano il muscolo scheletrico e cardiaco, inclusi fenotipi distrofici, cardiomiopatia e meccanismi legati alle aritmie, rendendolo rilevante per studi sulla segnalazione di membrana e sull’integrità muscolare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO caveolin-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CAV3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CAV3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CAV3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina caveolin-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CAV3 per lo studio della segnalazione di caveolin-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CAV3 critici per la funzione di caveolin-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CAV3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal caveolin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal caveolin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CAV3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal caveolin-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR caveolin-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CAV3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CAV3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.