CatSper Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403796
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CatSper O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico CatSper, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CatSper Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403796 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
CATSPER1 codifica o CatSper, uma subunidade de um canal iônico específico de espermatozoides, necessária para o influxo de cálcio que impulsiona a motilidade hiperativada e dá suporte à sinalização associada à capacitação. A atividade do canal CatSper integra mudanças no potencial de membrana e na dinâmica intracelular de Ca2+ para regular os padrões de batimento do flagelo e eventos de fosforilação a jusante essenciais para a fertilização. A disrupção de CATSPER1 está ligada à função espermática prejudicada e se associa a fenótipos de infertilidade masculina, tornando-o um alvo-chave para estudos mecanísticos do controle da motilidade espermática. Como componente de um complexo de canal com múltiplas subunidades, o CatSper1 também serve como ponto de entrada para investigar a montagem, o tráfego e a regulação de canais iônicos em espermatozoides.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CatSper (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CATSPER1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CATSPER1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CATSPER1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CatSper.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CATSPER1 para a investigação da sinalização de CatSper, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CATSPER1 críticos para a função CatSper
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CATSPER1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo CatSper Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CatSper Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CATSPER1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo CatSper Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CatSper (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CATSPER1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CATSPER1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.