Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
cathepsin D Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419875
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- cathepsin D Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico cathepsin D, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: cathepsin D Antibody (D-7): sc-377299
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
cathepsin D Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-419875 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino Ctsd codifica la catepsina D, un’endopeptidasi aspartica lisosomiale fondamentale per il turnover proteico intracellulare e l’omeostasi endolisosomiale. La catepsina D partecipa al flusso autofagico, alla degradazione mediata dai lisosomi e alla processazione di peptidi bioattivi, influenzando così la presentazione dell’antigene e reti più ampie di proteostasi. Un’alterazione dell’attività di CTSD è associata a disfunzione lisosomiale, vulnerabilità neuronale e modifiche della segnalazione infiammatoria, rendendola rilevante per studi sulla neurodegenerazione e sulle risposte allo stress metabolico. In modelli cellulari e animali, Ctsd viene inoltre utilizzato per analizzare il crosstalk tra funzione lisosomiale, apoptosi e vie di controllo qualità mitocondriale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO cathepsin D (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ctsd in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ctsd insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ctsd a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina cathepsin D.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ctsd per lo studio della segnalazione di cathepsin D, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Ctsd critici per la funzione di cathepsin D
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ctsd per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal cathepsin D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal cathepsin D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ctsd. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal cathepsin D Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR cathepsin D (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ctsd per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ctsd definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.