caspase-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401079-NIC

CASP2 codifica la caspasi-2, una proteasi cisteinica iniziatrice che integra i segnali di stress cellulare per regolare l’apoptosi, i checkpoint del ciclo cellulare e la stabilità genomica. La caspasi-2 partecipa alla segnalazione di morte intrinseca e a vie responsive allo stress, incluse le risposte associate a p53 al danno al DNA e allo stress ossidativo, e può influenzare la permeabilizzazione della membrana esterna mitocondriale tramite il clivaggio di effettori a valle. Collegando il rilevamento del danno alla morte cellulare programmata e al controllo mitotico, CASP2 contribuisce al mantenimento dell’omeostasi tissutale ed è stato studiato in contesti di tumorigenesi, neurodegenerazione e stress infiammatorio. Un’attività disfunzionale di CASP2 è stata associata a una suscettibilità alterata all’apoptosi e a una compromessa eliminazione delle cellule danneggiate, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulle decisioni di destino cellulare.

caspase-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CASP2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CASP2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CASP2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CASP2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.