CARD 11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402770-ACT

CARD11 (CARMA1) codifica uma proteína de suporte (scaffold) que contém um domínio de recrutamento de caspase e que conecta a sinalização do receptor de antígeno a programas transcricionais a jusante em linfócitos. Após o engajamento do receptor de célula T (TCR) ou do receptor de célula B (BCR), CARD11 promove a montagem do complexo CARD11–BCL10–MALT1 (CBM), permitindo a ativação das vias de NF-κB, JNK e p38 MAPK, que controlam proliferação, produção de citocinas e sobrevivência. A atividade desregulada de CARD11 está associada a defeitos de sinalização imunológica e ativação aberrante de linfócitos, e alterações recorrentes foram relatadas em várias neoplasias linfoides. Como um hub de sinalização, CARD11 é frequentemente estudado para dissecar a sinalização proximal ao receptor, eventos de sinalização dependentes de ubiquitina e desfechos transcricionais na imunidade adaptativa.

CARD 11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CARD11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CARD 11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CARD11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CARD11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CARD 11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CARD11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CARD 11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CARD 11 em células tumorais com expressão de CARD11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.