CapG CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416526-ACT

CAPGは、ゲルソリン／ビリンファミリーに属するカルシウム依存性アクチン結合タンパク質CapGをコードしており、アクチンフィラメントを切断することなくプラス端（barbed end）をキャップすることで、細胞皮質におけるアクチンの組み立てや細胞骨格の再構築を制御します。CapGは、膜ラッフリング、貪食、細胞接着、細胞運動を調節し、細胞外からのシグナルを細胞構造のダイナミックな変化へと結び付けます。これらの機能により、CAPGはアクチン重合や細胞骨格駆動性のトラフィッキングを制御する経路（RhoファミリーGTPアーゼやインテグリン関連シグナルによって協調される過程を含む）と関連付けられています。CAPGの発現異常は、移動性・浸潤性の表現型の変化と関連して報告されており、腫瘍進展、マクロファージ機能、炎症性微小環境といった文脈でしばしば研究対象となります。

CapG CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CAPGの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CapG CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CAPG 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCAPG転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CapGの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCAPG遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCapG依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCAPG発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCapG経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。