calsequestrin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403375

概要

CASQ1は、骨格筋の筋小胞体（SR）内腔に局在する高容量のCa²⁺結合タンパク質であるカルセクエストリン1をコードしており、Ca²⁺を緩衝して興奮収縮連関の形成に寄与する。リアノジン受容体複合体や接合部SR成分と相互作用することで、CASQ1は収縮性、疲労抵抗性、筋線維の恒常性を規定するCa²⁺放出および再取り込みのダイナミクスを支える。CASQ1依存的なCa²⁺ハンドリングの破綻は、細胞内Ca²⁺シグナルの変化、酸化ストレス応答、ならびにSR構造の再編成と関連する。遺伝学的および機能的研究により、CASQ1は悪性高熱様表現型への感受性や、Ca²⁺貯蔵の障害およびCa²⁺放出の制御異常を特徴とするその他の骨格筋疾患への関与が示唆されている。

calsequestrin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCASQ1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CASQ1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CASQ1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、calsequestrin 1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、calsequestrin 1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CASQ1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• calsequestrin 1の機能に不可欠なCASQ1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CASQ1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• calsequestrin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびcalsequestrin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CASQ1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  calsequestrin 1 HDRプラスミド（h）および calsequestrin 1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCASQ1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCASQ1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。