Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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CALM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433276
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CALM Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CALM, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CALM Antibody (A-2): sc-271224
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CALM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-433276 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Picalm (proteina di assemblaggio della clatrina legante i fosfatidilinositoli) codifica CALM, un adattatore citosolico che collega il legame ai fosfoinositidi alla formazione di fossette rivestite di clatrina e alla selezione del carico durante l’endocitosi. CALM regola l’internalizzazione dei recettori, il riciclo delle vescicole sinaptiche e il traffico endosomiale, influenzando così l’omeostasi di membrana e la dinamica della segnalazione a valle. Nei sistemi murini, l’alterazione di Picalm può modificare le vie di trasporto intracellulare e il flusso autofagia–lisosoma, processi spesso studiati in ambito neuronale ed ematopoietico. Studi genetici e funzionali hanno collegato la biologia di PICALM/CALM a difetti di traffico associati alla neurodegenerazione e a programmi di crescita cellulare deregolati, attraverso un turnover recettoriale e un trasporto vescicolare alterati.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CALM (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Picalm in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Picalm insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Picalm a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CALM.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Picalm per lo studio della segnalazione di CALM, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Picalm critici per la funzione di CALM
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Picalm per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CALM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CALM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Picalm. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CALM Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CALM (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Picalm per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Picalm definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.