cadherin-26 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-436285-ACT

O gene Cdh26 de camundongo codifica a caderina-26, uma molécula de adesão célula–célula dependente de cálcio pertencente à superfamília das caderinas, que contribui para a organização do tecido epitelial e para a manutenção da integridade da barreira. Por meio de interações associadas às junções aderentes, a caderina-26 sustenta a polaridade celular, a sinalização dependente de contato e a regulação coordenada da dinâmica do citoesqueleto, que influenciam a diferenciação e o remodelamento epiteliais. Padrões alterados de expressão de caderinas são frequentemente associados a mudanças em adesão, migração e respostas inflamatórias dos tecidos, tornando o Cdh26 um alvo útil para estudar a homeostase epitelial e programas de remodelamento dependentes do contexto. Em sistemas murinos, a modulação de Cdh26 pode ajudar a investigar como redes de adesão se cruzam com vias de sinalização do desenvolvimento e associadas à imunidade em tecidos de barreira.

cadherin-26 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cdh26 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cadherin-26 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cdh26 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cdh26, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cadherin-26. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cdh26 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cadherin-26 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cadherin-26 em células tumorais com expressão de Cdh26 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.