Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CA III Double Nickaseプラスミド (h): sc-403538-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CA III Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CA IIIダブルニカースプラスミド（h）およびCA IIIダブルニカースプラスミド（h2）は、CA3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CA III 抗体 (F-10): sc-373729
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CA III Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403538-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CA III Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403538-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトCA3は、炭酸脱水酵素III（CA III）をコードしている。CA IIIは細胞質に存在する亜鉛含有メタロ酵素で、CO₂を重炭酸イオン（HCO₃⁻）とプロトンへ可逆的に水和させる反応を触媒し、細胞内pHの制御およびCO₂/HCO₃⁻の緩衝に寄与する。CA IIIは酸化的な骨格筋で高発現しており、S-グルタチオン化を受け得る反応性システイン残基を介してレドックス恒常性にも関与し、酸化ストレスに対する細胞応答と結び付いている。酸塩基平衡とレドックス感受性プロセスを調節することで、CA IIIは筋生理に関連する代謝制御やストレス適応経路と交差する。CA3の発現変動およびCA III活性の変化は、筋機能障害や代謝ストレス状態の文脈で報告されており、細胞代謝と酸化損傷を研究する上で有用なマーカーであると同時に、機構的な要所（ノード）となり得る。
CA III ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CA3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CA3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CA3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CA3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。