C9orf72 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417630-ACT

O C9orf72 codifica uma proteína citoplasmática implicada no tráfego endossomal, na regulação da autofagia e na homeostase relacionada a lisossomos por meio de interações com GTPases Rab e reguladores de sinalização imune. É amplamente expresso no sistema nervoso e em linhagens mieloides, onde influencia a dinâmica de vesículas, a proteostase e o tônus inflamatório. A desregulação de C9orf72 está fortemente ligada à biologia de doenças neurodegenerativas, particularmente a mecanismos que envolvem alteração transcricional associada à expansão de repetições, metabolismo de RNA e estresse proteotóxico. Como resultado, o C9orf72 é frequentemente estudado em vias que conectam a função do eixo autofagia–lisossomo, a imunidade inata e a vulnerabilidade neuronal.

C9orf72 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C9orf72 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C9orf72 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C9orf72 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C9orf72, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C9orf72. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C9orf72 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C9orf72 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C9orf72 em células tumorais com expressão de C9orf72 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.