C9 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401198-ACT

ヒトC9は補体成分9をコードしており、補体カスケードの終末エフェクターとして膜攻撃複合体（MAC）内で重合し、標的膜に孔を形成して溶解性障害を促進します。C9の機能は、古典経路・レクチン経路・代替経路の活性化を介した自然免疫シグナルと統合され、炎症、オプソニン化、病原体排除を形作ります。補体終末経路の活性異常およびMAC沈着は、免疫介在性疾患や変性疾患を含むさまざまな病態における組織障害と慢性炎症に関与すると示唆されており、補体駆動性病態を研究するための機序的ハブとしてC9を用いる根拠となります。C9発現を実験的に調節することで、終末補体活性が細胞ストレス応答、バリア機能の維持、免疫細胞と組織の相互作用にどのように影響するかを検証できます。

C9 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性C9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C9 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における C9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はC9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のC9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびC9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。