C5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401533-ACT

O componente 5 do complemento humano (C5) codifica um efetor central da cascata do complemento que é clivado em C5a e C5b durante a ativação pelas vias clássica, da lectina ou alternativa. O C5a atua como uma potente anafilatoxina que sinaliza por meio de receptores de C5a para promover quimiotaxia, liberação de citocinas e ativação de células mieloides, enquanto o C5b inicia a montagem do complexo de ataque à membrana terminal (C5b–C9), levando à lise da célula-alvo. Por meio desses processos, o C5 integra o reconhecimento imune inato com a amplificação inflamatória e a defesa contra microrganismos. A ativação desregulada de C5 é frequentemente estudada no contexto de inflamação mediada pelo complemento, lesão vascular e dano tecidual associado a autoimunidade, em que a sinalização alterada de C5a e a formação do MAC podem contribuir para a patologia.

C5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C5 em células tumorais com expressão de C5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.