C3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400622-ACT

O componente 3 do complemento humano (C3) é um ponto central da cascata do complemento, produzido como um zimogénio secretado que é clivado proteoliticamente em C3a e C3b para amplificar as respostas imunitárias inatas. O C3b opsoniza covalentemente os alvos, promovendo a fagocitose e a depuração de complexos imunes, enquanto o C3a atua como uma anafilatoxina que modula o recrutamento de leucócitos e a sinalização inflamatória. Por integrar as vias clássica, das lectinas e alternativa, o C3 regula a defesa do hospedeiro, a poda sináptica e a comunicação cruzada com redes de coagulação e de citocinas. A atividade ou o processamento desregulados do C3 estão implicados em inflamação mediada pelo complemento e lesão tecidular, com relevância para doenças autoimunes, biologia de infeções e condições neuroinflamatórias e degenerativas.

C3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C3 em células tumorais com expressão de C3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.