Plásmido Doble Nickase (h) C1s: sc-404794-NIC

C1S codifica el componente del complemento C1s, una proteasa de serina modular que funciona dentro del complejo C1 para iniciar la vía clásica del complemento. Tras su activación, C1s escinde C4 y C2 para generar la convertasa de C3, vinculando el reconocimiento de complejos inmunes con la opsonización posterior y la señalización inflamatoria. La actividad de C1s se entrecruza con cascadas proteolíticas, el procesamiento de proteínas extracelulares y la regulación de la inmunidad innata, modulando las respuestas de citocinas y la eliminación de material apoptótico. La activación desregulada del complemento clásico y las variantes genéticas que afectan a C1S se han asociado con inflamación mediada por el sistema inmune, susceptibilidad a infecciones recurrentes y fenotipos de lesión tisular impulsada por el complemento, lo que respalda su relevancia en investigación en inmunología y biología vascular.

C1s El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus C1S en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de C1S. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de C1S. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con C1S alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.