C1qL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-432618-ACT

C1ql2 codifica a C1qL2, uma proteína secretada da superfamília C1q/TNF que é enriquecida no sistema nervoso e está implicada na organização de sinapses e na comunicação neuronal. A C1qL2 pode atuar como organizadora sináptica ao acionar sinalização mediada por receptores que influencia a conectividade de circuitos excitatórios, o padrão de neuritos e a plasticidade dependente de atividade. Por meio de seu papel na sinalização extracelular nas sinapses, o C1ql2 é estudado em vias ligadas ao neurodesenvolvimento e à remodelação de redes, com relevância para mecanismos subjacentes a fenótipos cognitivos e neuropsiquiátricos. Em modelos de camundongo, a modulação da expressão de C1ql2 permite investigar como proteínas do tipo complemento moldam a manutenção sináptica e a função de circuitos.

C1qL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C1ql2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C1qL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C1ql2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C1ql2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C1qL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C1ql2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C1qL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C1qL2 em células tumorais com expressão de C1ql2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.