C1QBP CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419387-ACT

C1qbp は、多機能なミトコンドリア／細胞表面関連タンパク質である C1QBP をコードしており、ミトコンドリアリボソームの機能、酸化的リン酸化の恒常性、ならびに細胞ストレス応答の制御に関与するとされています。マウス細胞では、C1QBP は、補体関連プロセスや炎症性シグナルに影響する相互作用を介して、アポトーシスの制御、代謝適応、自然免疫シグナル伝達に関与することが示唆されています。C1QBP の発現を攪乱すると、エネルギー代謝や活性酸素種（ROS）の処理が変化し、増殖能や組織恒常性に関連する経路に影響を及ぼし得ます。これらの機能により、C1qbp は、疾患関連モデルにおけるミトコンドリア機能不全の機序や炎症関連表現型を研究するうえで有用な標的となります。

C1QBP CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性C1qbpの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C1QBP CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における C1qbp 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はC1qbp転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C1QBPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のC1qbp遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC1QBP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびC1qbp発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC1QBP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。