C1q-A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402156-ACT

C1QA codifica la catena A del componente del complemento C1q, una molecola di riconoscimento che avvia la via classica del complemento legandosi a complessi immuni e a superfici self alterate. C1q partecipa all’opsonizzazione, alla rimozione delle cellule apoptotiche e alla modulazione della segnalazione immunitaria innata, ed è fortemente espresso da macrofagi e microglia, dove contribuisce a plasmare i programmi infiammatori. Attraverso l’attivazione della cascata del complemento e l’interazione con vie fagocitiche e citochiniche, C1q influenza la potatura sinaptica, il rimodellamento tissutale e l’omeostasi immunitaria. Un’attività deregolata di C1QA/C1q è stata associata a fenotipi autoimmuni, neuroinfiammazione e patologie guidate dal complemento, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici in immunologia e neuroscienze.

C1q-A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di C1QA senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

C1q-A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus C1QA nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione C1QA, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di C1q-A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus C1QA nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da C1q-A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via C1q-A nelle cellule tumorali con espressione di C1QA silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.