c-Jun Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421207-ACT

Jun codifica o fator de transcrição c-Jun, um componente central do complexo AP-1 que integra entradas de sinalização de MAPK para controlar a expressão gênica responsiva a estímulos. O c-Jun regula programas envolvidos na progressão do ciclo celular, apoptose, diferenciação e respostas inflamatórias por meio de ligação cooperativa com proteínas da família FOS em sítios AP-1. Em sistemas murinos, a atividade de JUN/AP-1 é amplamente usada como um marcador de sinalização de estresse e citocinas, conectando vias a montante como JNK, ERK e p38 à remodelação transcricional a jusante. A desregulação da sinalização de c-Jun está implicada na transformação oncogênica, remodelamento tecidual e patologia mediada pelo sistema imune, tornando Jun um nó comum para estudos mecanísticos do acoplamento entre sinalização e transcrição.

c-Jun O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Jun sem alterar a sequência de ADN subjacente.

c-Jun O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Jun em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Jun, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de c-Jun. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Jun nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de c-Jun no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via c-Jun em células tumorais com expressão de Jun silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.