c-Jun Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400077-ACT

Il gene umano **JUN** codifica per **c-Jun**, un componente fondamentale del complesso del fattore di trascrizione **AP-1**, che integra segnali extracellulari in programmi di espressione genica che controllano proliferazione, differenziamento, apoptosi e risposte cellulari allo stress. L’attività di c-Jun è regolata dalla fosforilazione a valle della segnalazione **MAPK/JNK**, collegando stimoli infiammatori, stress ossidativo e vie attivate dai fattori di crescita alla cromatina e alla riprogrammazione trascrizionale. In cooperazione con altri membri della famiglia AP-1 e con reti trascrizionali più ampie, JUN influenza processi quali la transizione epitelio-mesenchimale, la regolazione immunitaria e l’adattamento metabolico. Una deregolazione della segnalazione **JUN/AP-1** è frequentemente associata a trasformazione oncogena, fenotipi invasivi e resistenza allo stress cellulare in molteplici contesti patologici, a supporto del suo valore come nodo meccanicistico nella ricerca focalizzata sulle vie di segnalazione.

c-Jun Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di JUN senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

c-Jun Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus JUN nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione JUN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di c-Jun. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus JUN nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da c-Jun nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via c-Jun nelle cellule tumorali con espressione di JUN silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.