c-Fms/CSF-1R Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419839-ACT

Csf1r codifica a tirosina quinase de recetor c-Fms/CSF-1R, um regulador-chave do compromisso de linhagem monócito–macrófago, da sobrevivência e da polarização funcional em ratinhos. Após a ligação de CSF-1 ou IL-34, o CSF-1R ativa as vias de sinalização a jusante PI3K–AKT, MAPK/ERK e JAK/STAT para coordenar a proliferação, a quimiotaxia e programas de expressão génica inflamatória. A atividade do CSF-1R molda a homeostase dos macrófagos residentes em tecidos e a diferenciação de osteoclastos, influenciando a remodelação óssea e processos do desenvolvimento. A desregulação da sinalização de Csf1r e da biologia dos macrófagos está amplamente implicada em modelos de neuroinflamação, na função de células mieloides associadas ao tumor e em doenças inflamatórias crónicas.

c-Fms/CSF-1R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Csf1r sem alterar a sequência de ADN subjacente.

c-Fms/CSF-1R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Csf1r em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Csf1r, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de c-Fms/CSF-1R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Csf1r nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de c-Fms/CSF-1R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via c-Fms/CSF-1R em células tumorais com expressão de Csf1r silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.