C/EBP beta Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419623-ACT

Il gene murino **Cebpb** codifica **C/EBP beta**, un fattore di trascrizione della famiglia *basic leucine zipper* che coordina programmi genici coinvolti nella differenziazione mieloide, nell’adipogenesi e nelle risposte epatiche di fase acuta. Integra i segnali a valle di citochine infiammatorie e fattori di crescita per regolare la progressione del ciclo cellulare, la sopravvivenza e il rimodellamento metabolico, con ruoli di rilievo nella polarizzazione dei macrofagi e nella trascrizione responsiva allo stress. L’attività di C/EBP beta interagisce con vie quali **NF-κB**, **MAPK/ERK**, **JAK/STAT** e **TGF-β**, modulando l’accessibilità della cromatina e l’utilizzo degli enhancer in cellule con un destino di linea già definito. Un’espressione o un’attività deregolata di **Cebpb** è stata associata a fenotipi infiammatori, disfunzioni metaboliche e stati trascrizionali correlati ai tumori, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sul crosstalk immuno‑metabolico e sul controllo trascrizionale.

C/EBP beta Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cebpb senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

C/EBP beta Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cebpb nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cebpb, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di C/EBP beta. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cebpb nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da C/EBP beta nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via C/EBP beta nelle cellule tumorali con espressione di Cebpb silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.