BTEB1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421299-ACT

O gene Klf9 de camundongo codifica o fator de transcrição BTEB1 (Kruppel-like factor 9), uma proteína de ligação ao DNA do tipo dedo de zinco que modula a atividade de promotores em resposta a sinais do desenvolvimento e hormonais. O BTEB1 integra sinalização de vias de receptores nucleares, incluindo programas de glicocorticoides e de hormônio tireoidiano, para moldar redes gênicas que controlam a maturação neuronal, a diferenciação celular e a transcrição adaptativa ao estresse. Ele também tem sido associado à regulação de checkpoints do ciclo celular, a respostas ao estresse oxidativo e à homeostase metabólica, por meio de ativação e repressão transcricionais dependentes do contexto. A atividade desregulada de Klf9/BTEB1 tem sido relacionada a alterações na função neuroendócrina e a estados transcricionais relevantes para inflamação, fibrose e remodelamento oncogênico, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de circuitos de regulação gênica.

BTEB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Klf9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BTEB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Klf9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Klf9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BTEB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Klf9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BTEB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BTEB1 em células tumorais com expressão de Klf9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.