bradykinin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402422-ACT

KNG1 codifica o cininogénio de alto peso molecular, o precursor do mediador peptídico bradicinina, que é libertada por calicreínas durante a ativação do sistema de contacto plasmático. A bradicinina sinaliza principalmente através de BDKRB1/BDKRB2 para regular a permeabilidade vascular, o tónus do músculo liso, a produção de óxido nítrico e de prostaglandinas, e respostas inflamatórias neurogénicas. Este eixo interseta-se com as cascatas de coagulação e do complemento, ligando o processamento de KNG1 à hemostase, à biologia endotelial e a redes de sinalização inflamatória. A atividade alterada do sistema cinina–calicreína tem sido associada a fenótipos de edema e inflamação desregulados, tornando KNG1/bradicinina um alvo comum para estudos mecanísticos em inflamação vascular e vias relacionadas.

bradykinin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KNG1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

bradykinin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KNG1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KNG1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de bradykinin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KNG1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de bradykinin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via bradykinin em células tumorais com expressão de KNG1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.