BR-cadherin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401987-ACT

CDH12 codifica la BR-caderina, una caderina classica arricchita nel sistema nervoso che media l’adesione omofilica cellula‑cellula dipendente da Ca2+ e sostiene l’architettura tissutale. Tramite il legame con le catenine e la connessione al citoscheletro di actina, la BR‑caderina partecipa all’organizzazione delle giunzioni aderenti, alla polarità cellulare e a programmi di migrazione coordinata che modellano lo sviluppo neurale. Alterazioni dell’espressione delle caderine possono perturbare la dinamica di adesione epiteliale/neurale e influenzare il cross‑talk di segnalazione con vie quali Wnt/β‑catenina e il rimodellamento del citoscheletro regolato dalle GTPasi Rho. La deregolazione di CDH12 è stata riportata in studi su fenotipi neuroevolutivi e biologia tumorale, motivando l’indagine su come cambiamenti dello stato di adesione influenzino invasione, connettività e differenziazione.

BR-cadherin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDH12 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BR-cadherin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDH12 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDH12, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BR-cadherin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDH12 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BR-cadherin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BR-cadherin nelle cellule tumorali con espressione di CDH12 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.