BPTF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404092-ACT

BPTF (fator de transcrição com domínio bromodomínio e dedo PHD) codifica um componente regulador central do complexo NURF de remodelamento de cromatina dependente de ATP, que interpreta marcas de histonas e modula o posicionamento dos nucleossomos para controlar programas transcricionais. Ao acoplar um bromodomínio e um dedo PHD à atividade de remodelamento de cromatina, o BPTF influencia a função de enhancers, a acessibilidade de promotores e a expressão gênica específica de linhagem durante o desenvolvimento e a diferenciação celular. A regulação dependente de BPTF intersecciona-se com vias que governam a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e a organização da cromatina, tornando-o um alvo frequente em estudos de controle epigenético. A expressão ou atividade desregulada de BPTF tem sido associada a estados transcricionais alterados observados em múltiplos contextos de doença, incluindo cânceres e fenótipos do neurodesenvolvimento, reforçando sua relevância como um nó mecanístico em patologias impulsionadas pela cromatina.

BPTF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BPTF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BPTF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BPTF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BPTF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BPTF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BPTF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BPTF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BPTF em células tumorais com expressão de BPTF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.