BPI CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404909

概要

BPI（殺菌／透過性亢進タンパク質）は、好中球顆粒および粘膜の自然免疫に関わる因子で、グラム陰性菌のリポ多糖（LPS）に高い親和性を示します。BPIは外膜の完全性を損なうことでエンドトキシン活性を中和し、細菌殺傷を促進します。LPSに結合し、LPS結合タンパク質やCD14/TLR4シグナル伝達因子との相互作用を調節することで、BPIは下流の炎症反応やサイトカイン産生にも影響を与え得ます。BPIの発現と活性は、宿主—病原体相互作用、好中球の脱顆粒、バリア防御の文脈で評価されることが一般的です。LPS処理の破綻やBPIレベルの変化は、炎症性の気道・消化管疾患、敗血症の病態、グラム陰性菌感染に対する感受性などにおいて研究されています。

BPI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるBPI遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BPI内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BPIのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、BPIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、BPIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BPI欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• BPIの機能に不可欠なBPIエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、BPIゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• BPI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびBPI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BPI遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  BPI HDRプラスミド（h）および BPI HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBPIホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBPI標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。