BPGM CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405810

概要

ビスホスホグリセリン酸ムターゼ（BPGM）は赤血球系で高発現する酵素で、ヘモグロビンの酸素親和性を左右する主要なアロステリックエフェクターである 2,3-ビスホスホグリセリン酸（2,3-BPG）の量を調節します。BPGMは 1,3-ビスホスホグリセリン酸と 2,3-BPG を相互変換することで、解糖系フラックスを酸素運搬の生理機能および赤血球の代謝恒常性と結び付けています。BPGM活性が変化すると 2,3-BPG 濃度がシフトして組織酸素化が変調し得るため、赤血球代謝、低酸素適応、血液学的表現型の研究において重要です。2,3-BPG はヘモグロビン量を変えずにその機能へ影響することから、BPGMは酸素結合ダイナミクスに影響する代謝制御点を解析するためにしばしば用いられます。

BPGM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるBPGM遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BPGM内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BPGMのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、BPGMタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、BPGMシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BPGM欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• BPGMの機能に不可欠なBPGMエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、BPGMゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• BPGM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびBPGM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BPGM遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  BPGM HDRプラスミド（h）および BPGM HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBPGMホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBPGM標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。