BNIP-3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400985-NIC

O gene humano **BNIP3** codifica a **BNIP-3**, uma proteína atípica do tipo **BH3-only** que se localiza nas mitocôndrias e regula decisões de destino celular em condições de hipóxia e estresse metabólico. A BNIP-3 participa do controle de qualidade mitocondrial ao promover a **mitofagia** por meio de interações com **LC3** via seu motivo **LIR**, e também pode influenciar a permeabilidade mitocondrial e programas de morte celular dependendo do contexto. Sua expressão está intimamente ligada à sinalização de **HIF-1**, à homeostase de **espécies reativas de oxigênio (ROS)** e a mudanças na fosforilação oxidativa, conectando a BNIP-3 a vias mais amplas que controlam a bioenergética e a adaptação ao estresse. A atividade desregulada de BNIP-3 tem sido associada a condições com lesão hipóxica e disfunção mitocondrial, incluindo a biologia do câncer, danos relacionados à isquemia e neurodegeneração, o que a torna um alvo frequente em estudos mecanísticos de respostas ao estresse.

BNIP-3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus BNIP3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de BNIP3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função BNIP3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com BNIP3 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.