BMPR-II Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400895-LAC

BMPR2 codifica il recettore di tipo II delle proteine morfogenetiche dell’osso (BMPR-II), un recettore chinasi serina/treonina della superfamiglia TGF-β/BMP che trasduce i ligandi BMP extracellulari nella segnalazione intracellulare mediata da SMAD1/5/8. Dopo il legame con il ligando, BMPR-II si associa ai recettori BMP di tipo I per innescare cascate di fosforilazione che regolano programmi trascrizionali coinvolti nell’omeostasi vascolare, nel comportamento delle cellule muscolari lisce e nella definizione dei pattern di sviluppo. La segnalazione di BMPR2 interagisce anche con vie non canoniche, incluse le reti MAPK e delle Rho GTPasi, influenzando la dinamica del citoscheletro e la migrazione cellulare. Un’attività o un’espressione di BMPR2 deregolate sono fortemente associate alla biologia dell’ipertensione arteriosa polmonare e a fenotipi più ampi di rimodellamento vascolare, rendendolo un bersaglio ampiamente utilizzato negli studi meccanicistici sulla regolazione della via BMP.

Le particelle di attivazione lentivirale BMPR-II (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di BMPR2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BMPR-II (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione BMPR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BMPR-II. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo BMPR2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.