BMPR-IA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400581-ACT

BMPR1A codifica o receptor de proteína morfogenética óssea do tipo IA (BMPR-IA), um receptor quinase de serina/treonina que transmite sinais de ligantes BMP para regular decisões de destino celular, padronização tecidual e o controlo homeostático da proliferação e da diferenciação. Após a ligação do ligante em conjunto com recetores BMP do tipo II, o BMPR-IA ativa a sinalização canónica via SMAD1/5/9 e interage com vias MAPK não canónicas para moldar programas transcricionais em diversos tipos celulares. A atividade de BMPR1A é central para processos de desenvolvimento e regeneração, particularmente em linhagens epiteliais e mesenquimatosas, e contribui para uma regulação dependente do contexto do comportamento de células estaminais/progenitoras. A desregulação da sinalização BMP/BMPR1A tem sido implicada em anomalias congénitas e fenótipos relacionados com o cancro, por meio de alterações na diferenciação e no controlo do crescimento.

BMPR-IA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BMPR1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BMPR-IA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BMPR1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BMPR1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BMPR-IA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BMPR1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BMPR-IA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BMPR-IA em células tumorais com expressão de BMPR1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.